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生化危机5影片设定在1998年，影片不再是只把焦点集中在爱丽丝这个角色身上，吉尔将在由安布雷拉（Umbrella）制造的僵尸潮的爆发中扮演重要角色。里昂·S·肯尼迪（Leon·S·Kennedy）也将入主，在《生化危机4》电影中就有大量来自游戏第五代的boss，所以这次再把游戏第2,4代的第一男主角里昂带入电影版《生化5》也算情理之中。[2]影片主要讲述保护伞公司研发的T病毒持续侵袭地球，仅存的人类被逼到面临人吃人的绝境。人类唯一的希望全在生化人爱丽丝身上，当她从北冰洋下的保护伞公司的秘密实验室里苏醒后，跑遍以东京、纽约、华盛顿和莫斯科四地为背景的实验区，试图逃出生化实验基地。没想到，一连串的意外让爱丽丝面临真假难辨的困境，在昔日敌人、伙伴和新盟友艾达的加入下，爱丽丝该如何在天谴大限来临前找出生路，带领人类度过末日危机？保护伞公司特种部队首领吉尔·瓦伦婷带领公司所有的特种部队进攻了‘阿卡迪亚号’，也杀死了大部分的幸存者，而爱丽丝尽全力去反抗，但却被一架坠毁的直升机震入大海。

当爱丽丝醒来后，发现自己竟然成为一名普通的家庭主妇，而自己的丈夫竟然是昔日已死而卡洛斯·奥利维拉，且共同拥有一个女儿贝基。当她觉得之前的一切都是一场梦时，一群嗜血僵尸突然进入他的家且当场吃掉卡洛斯，而爱丽丝将贝基救出房子后竟然又遇到昔日已死的蕾恩，当蕾恩将爱丽丝和贝基救出后，因遇到车祸而昏迷不醒。爱丽丝与贝基只好进入房子躲避，当爱丽丝藏好贝基后打算与僵尸拼命，但却被变成僵尸的卡洛斯攻击致死。当再度醒来后，发现已回归原来的自己，也发现自己在保护伞的牢房里，而在顶头审问她的人是吉尔。吉尔质问她为谁效力，而爱丽丝却急切地想知道克里斯与克莱尔的下落，便被处以噪音的惩罚。但过了不久，用来控制吉尔的基地主电脑遭人入侵，而爱丽丝也逃出牢房。

当爱丽丝逃出走廊后竟然发现自己来到了东京银座，而过了不久出现几名普通市民，其中包括日本的第一名女感染者，后来出现几名感染者吃掉了大部分市民，而爱丽丝为了躲避众僵尸而再度跑进一条走廊，也在走廊深处到达了主控制室。爱丽丝在控制室里获得了更多的枪械，并跟艾达·王碰面，幸存的阿尔伯特·威斯克也通过显示屏告诉了艾莉丝他需要她，同时也派了以里昂·肯尼迪为首的援救部队（包括在洛杉矶幸存的卢瑟），以扫清基地的障碍而与爱丽丝接应，也设计了两小时爆炸的定时炸弹来摧毁基地。威斯克向爱丽丝说明基地是保护伞公司用来测试生化实验的基地，也由当初控制蜂巢的人工智能红色女王控制，此时吉尔与部队攻进控制室，但也发现爱丽丝与艾达早已逃脱。

当爱丽丝与艾达来到美国纽约试验场后遭到两只巨斧神的攻击，但两人却安然逃离，但里昂等人来到莫斯科试验场后遭到控制吉尔和试验基地的人工智能红色女王所派出的僵尸军团的攻击。爱丽丝与艾达来到郊区试验场，而在房子里发现了已死的爱丽丝复制体（家庭主妇），而艾达也向爱丽丝说明：保护伞公司利用由已死的艾萨克斯研发的人体DNA培育出复制体来增加试验场的人口（一次试验会死几百个人），也会对复制体植入基本记忆（让他们做出人体正常反映），但也有时会让复制体成为基地的特种部队队员。此时躲在房子里的贝基与爱丽丝相遇，贝基也把爱丽丝看成自己的母亲，而爱丽丝也接受了她。爱丽丝等人准备好东西后出门，但却在门口吉尔的部队，而爱丽丝发现部队的人是卡洛斯、蕾恩以及曾被削成碎片的万恩（部队复制体），艾达为了掩护爱丽丝与贝基逃离而被部队截获，而爱丽丝与贝基在莫斯科试验场的地铁站遇到逃离的蕾恩（普通市民）。

此时，里昂的部队被困在莫斯科试验场，出去后遇到变种生物“舔食者”，但在爱丽丝的帮助下逃离回地铁站，与贝基相遇后穿越试验场地底来到出口电梯，但贝基却被赶过来的舔食者抓走，而蕾恩被它当场打死，卢瑟与等人掩护爱丽丝离开后对付追过来的特种部队，但巴瑞为了帮助被蕾恩（部队复制体）挟持的艾达而被当场打死，但死前也将万恩开枪打死。爱丽丝将贝基救出后来到基地的复制体中心，而贝基看到爱丽丝的复制体后开始恐慌，甚至开始怀疑眼前的爱丽丝不是自己的母亲，但爱丽丝对她说“我现在是”后利用艾达的绳索枪逃出。里昂与卢瑟启动电梯时发现炸弹时间已到，而炸弹爆炸后摧毁了基地所有的试验场，而吉尔、蕾恩与艾达发现后立刻逃离，而卡洛斯及其他部队全部被洪水淹没，卢瑟搭电梯上去后与逃离的爱丽丝与贝基相遇，上去后立刻开着雪车离开。

众人来到结冰的大海平面后被搭潜水艇逃离的吉尔与蕾恩阻止，而吉尔命令蕾恩向自己身体打入控制僵尸的寄生虫后变成不死之身，而爱丽丝与吉尔打斗时注意到吉尔胸前的红色机械虫，于是立刻将机械虫拿下，而吉尔脱离控制后立刻倒下。而蕾恩打卢瑟时将卢瑟的心跳打停，也将里昂打成重伤，而吉尔恢复意识后将枪扔给爱丽丝，而蕾恩得意洋洋地站在冰层上，但爱丽丝却将蕾恩脚底的冰层打碎，使得蕾恩掉入冰河后被从基地游出的僵尸拖下去（被吃掉或冻死）。里昂清醒后救了昏迷的艾达，而...

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